CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 199
Práctica 1.
VDRL - USR
Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y L.C.R. (no requiere reconstitución)
Agente de Diagnóstico
Introducción
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| VDRL - USR |
La Sífilis es una enfermedad generalizada, producida por Treponema pallidum.
Infecta el área genital, los labios, la boca o el ano y afecta tanto a los hombres como a las mujeres. Por lo general se adquiere por contacto sexual con una persona que la tiene. También puede pasar de la madre al bebé durante el embarazo. La etapa temprana de la sífilis suele causar una llaga única, pequeña e indolora. Algunas veces, causa inflamación de los ganglios linfáticos cercanos. Si no se trata, generalmente causa una erupción cutánea que no pica, frecuentemente en manos y pies. Muchas personas no notan los síntomas durante años. Los síntomas pueden desaparecer y aparecer nuevamente.
El diagnóstico se basa en la serología, con los métodos se determinan las 2 clases de anticuerpos:
- Cardiolipina: No treponema e inespecíficos.
- Antitreponemas: Específicos.
Debido a la facilidad en su determinación en el tipo Cardiolopina se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales, exámenes individuales o encuestas de población. La variante técnica más comúnmente empleada llamada VDRL (Venereal Disease Research laboratory) que determina la floculación en placa (cuantitativa) del antígeno con cardiolipina y lecitina.Objetivo
Mediante el empleo de conocimientos previamente adquiridos, lograr el correcto desarrollo de la práctica y de esta manera identificar la presencia o ausencia de los anticuerpos antes mencionados.
Reactivos
- Antígeno en suspensión estabilizado (VDRL)
- Control positivo.
- Control Negativo.
- Aguja No. 21 sin bisel.
- Pipetas desechables.
Material
- Placa cóncava
- Agitador mecánico
- Cronómetro
- Microscopio
Muestra: SUERO
Método cualitativo
1. En un anillo de la placa cóncava deposite 0.05 ml. del suero problema.
2. En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra una gota de control 
negativo, extender sobre la superficie del anillo.
negativo, extender sobre la superficie del anillo. 3. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizada previamente resuspendido.
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min. Las pruebas que se realicen en clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras, por lo tanto, la placa en rotación se puede cubrir con la tapa de una caja de petri humedecida previamente con una gasa. (Este paso se realizó de manera manual)
5. Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10x.
Resultados
Interpretación:
Control positivo: Presencia de floculación mediana o grande.
Control negativo: Ausencia de floculación.
Resultados | ||
Muestra 1 | Negativo | |
Muestra 2 | Negativo |
NOTA: Debido a que ninguna de muestras que analizamos resulto positiva, no se realizo el método cuantitativo, sin embargo se mencionará el procedimiento.
Método Cuantitativo.
1. Seleccionar los sueros positivos de la prueba cualitativa.
2. Colocar en una gradilla 6 tubos de 12 x 75 mm. y numerarlos.
3. Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 0.9%
4. Depositar. 0.5 ml. de suero, al tubo No. 1 y mezclar.
5. Pasar 0.5 ml. del tubo No. 1 al tubo No. 2 mezclar.
6. Pasar 0.5 ml. del tubo No. 2 al tubo No. 3 mezclar.
7. Continuar esta operación hasta el tubo No. 6.
8. Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa cóncava.
9. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la guja No. 21 sin bisel a cada una de las diluciones.
10. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 minutos.
11. Leer al microscopio con objetivo y ocular 10x.
Resultados
El titulo del suero problema será la ultima dilución presente un resultado positivo.
Ejemplo: Si se presenta floculación hasta el tubo No. 3 esta es la dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.
NOTA
1. Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
2. Sueros débiles positivos y con fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.
3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 minutos puede secarse la reacción y causar dificultad en la interpretación.
4. El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.
Conclusiones
La identificación del Treponema pallidum es posible después de la realización de la práctica anterior, mediante la observación de la floculación en las placas correspondientes. En caso de que los resultados hubieran sido positivos, habría sido necesaria la comprobación mediante la realización de titulaciones que confirmaran la positividad del suero problema por la facilidad de determinación con el antígeno VDRL. La utilidad de la prueba radica en que si la enfermedad (sífilis) se detecta a tiempo, se cura fácilmente con antibióticos. El uso correcto de preservativos de látex disminuye enormemente, aunque no elimina, el riesgo de adquirir y contagiarse la sífilis.
Referencias
Práctica 2.
ROSA DE BENGALA
Antígeno Brucelar Amortiguado para el Diagnóstico de Brucelosis
Prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas específicas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis).
Introducción
La brucelosis, también conocida como fiebre de Malta, es una enfermedad infecciosa que se presenta con episodios recurrentes de fiebre, debilidad, sudoración y dolores vagos. Es provocada
por una bacteria llamada Brucella, que está en la sangre, las secreciones y la leche de vacas, cerdos, ovejas y cabras. Las personas pueden infectarse al ingerir leche de vaca, de oveja o de cabra o sus derivados (manteca, quesos) que contengan microorganismos viables, es decir productos que hayan sido fabricados con leche sin pasteurizar. También se adquiere por contacto directo con animales infectados o sus productos (manejo de sangre, orina, descargas vaginales, fetos abortados y placentas de animales infectados), razón por lo que se considera que es una enfermedad profesional de veterinarios, carniceros, granjeros y ganaderos.
Placa de prueba.
El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 uL.
2. Utilizando la pipeta automática adicionar 30 uL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.
Para lograr la obtención de resultados confiables, es necesario iniciar la práctica con una correcta toma de muestra y conservación de los reactivos a utilizarse, ya que si no se respetan los pasos descritos y las condiciones impuestas los resultados pueden generar falsos positivos o negativos. El diagnóstico de Brucelosis es de gran importancia clínica para la selección de un donante de sangre o para evitar la diseminación de la enfermedad por medio de secreciones y fluidos corporales.
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| Brucelosis |
Objetivo
Lograr la correcta aplicación de la técnica indicada por el docente para la identificación de
Brucelosis en los pacientes.
Brucelosis en los pacientes. Reactivos
- Antígeno Rosa de Bengala
- Control Positivo de Brucella
- Control Negativo de Brucella
Material
Placa de prueba.
El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 uL.
Pipetas automáticas
Cronómetro
Procedimiento 1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.
2. Utilizando la pipeta automática adicionar 30 uL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.3.Mezclar suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después colocar 30 uL en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezclar ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra).
4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.
5. Con la ayuda de una fuente de luz directa leer el resultado.
Importante: Después de este tiempo la lectura ya no es válida.
Resultados
No Aglutinación - Suero Negativo
Cualquier cantidad de Aglutinación - Presencia de anticuerpos específicos. Suero Positivo
MUESTRAS | RESULTADOS |
Paciente 1 | Negativo |
Paciente 2 | Negativo |
En ambas muestras no hubo presencia de aglutinación de ningún tipo, por lo que se descarta la posibilidad de que alguno de los pacientes padezca Brucelosis.
Esta es sólo una prueba cualitativa de screening, la cual si resulta positiva debe ser confirmada mediante otra prueba cuantitativa para brucelosis como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en presencia de 2-Mercaptoetanol.
Conclusiones
Para lograr la obtención de resultados confiables, es necesario iniciar la práctica con una correcta toma de muestra y conservación de los reactivos a utilizarse, ya que si no se respetan los pasos descritos y las condiciones impuestas los resultados pueden generar falsos positivos o negativos. El diagnóstico de Brucelosis es de gran importancia clínica para la selección de un donante de sangre o para evitar la diseminación de la enfermedad por medio de secreciones y fluidos corporales.Referencias
