Práctica 5: PRUEBA DE COOMBS

Introducción

Los anticuerpos anti-inmunoglobulina fueron desarrollados por Robin Coombs para estudiar la enfermedad hemolítica

del recién nacido o eritroblastosis fetal, y la prueba para detectar dicha enfermedad se llama aún Prueba de Coombs.

Es una prueba que busca anticuerpos que puedan fijarse a los glóbulos rojos y causar su destrucción prematura (hemólisis).

Fundamento:

Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, que es una antiglobulina.

Hay dos formas de realizar  la prueba de Coombs: directa e indirecta.

PRUEBA DIRECTA

Detecta anticuerpos ya fijados a los hematíes y para ello se enfrentan los hematíes del paciente con antiglobulina. Se utiliza para detectar la enfermedad hemolítica del recién nacido y para otras anemias hemolíticas.

El suero de Coombs puede ser de dos clases: poliespecífico, si está dirigido contra la Ig G y el  componente C3d del complemento, y monoespecífico, si sólo esta dirigido contra la Ig G y algunos de los componentes del complemento.

Material

Gradilla. Centrífuga. Tubos de ensayo. Suero fisiológico. Pipetas Pasteur. Suero Coombs. Suspensión de hematíes problema.

Procedimiento

1.- Preparar una suspensión al 5% en solución salina.

2.- Colocar 1 gota de suero de Coombs en 1 tubo.

3.- Añadir 1-2 gotas de la suspensión.

4.- Mezclar y centrifugar 1-2 minutos a 2000 r.p.m.

5.-Sacar la centrifugadora y resuspender el botón celular y observar si hay o no aglutinación.                                                         Si hay aglutinación, hay Ac incompletos.

PRUEBA INDIRECTA

Fundamento:

Se pretende detectar generalmente la presencia en el suero del enfermo de Ac incompletos libres.               

Se incuba el suero del paciente con unos hematíes tipo (GR que no tienen adheridos a su superficie ningún tipo de Ig y ningún componente del complemento).                                                                                                                                                       La finalidad de esta incubación consiste en lograr una sensibilización in Vitro de los hematíes tipo por parte delos Ac incompletos que pueden estar contenidos en el suero problema. Los hematíes tipo que se suelen utilizar son los O+.

Material

Gradilla. Centrífuga. Tubos de ensayo. Solución salina. Pipetas Pasteur. Suero Coombs. Suspensión de hematíes al 5%.

Procedimiento

1.- Preparar una suspensión de hematíes tipo al 5% en solución salina.

2.- Colocar en un tubo 2 gotas de los hematíes tipo y 2 gotas de suero problema.

3.- Mezclar e incubar a 37⁰C durante 30 min.

4.- Lavar 3 veces el producto incubado en solución salina.

5.- Tras el último lavado resuspender el sedimento de hematíes.

6.-Añadir 2 gotas del suero de Coombs.

7.- Mezclar bien y centrifugar a 2000 r.p.m. de 1 a 2 minutos.

8.- Agitar el tubo y observar la presencia de aglutinación.

Resultados

Existencia de aglutinación	Presencia de Ac incompletos.
No existe aglutinación	No hay presencia de Ac incompletos.

Valores anormales

Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que se tienen Ac que actúan contra los hematíes, lo cual puede deberse a:

       Anemia hemolítica autoinmunitaria 

       Leucemia linfocítica crónica u otro transtorno linfoproliferativo.                                                                                    

       Anemia hemolítica inducida por fármacos.                                                                                                              

       Eritroblastosis fetal.                                                                                                                                                      

       Mononucleosis infecciosa.                                                                                                                                                    

       Infección por micoplasma.                                                                                                                                                          

       Sífilis.                                                                                                                                                                                      

       Lupus eritematoso sitémico u otra afección reumatológica.                                                                                     

       Reacción a transfusión sanguínea.

                                                                                                                                               

Una prueba de Coombs indirecta anormal (positiva) significa que se tienen Ac que actuarán  contra los hematíes, que el cuerpo asume como extraños.  Esto puede sugerir  la presencia de:

•        Anemia hemolítica autoinmunitaria o Anemia hemolítica inducida por fármacos.                                                     
•        Eritroblastosis fetal.     
•         Incompatibilidad sanguínea.                                                                                                                                               

                                                                                                                                                                                                                         

Referencias

Manual de prácticas de inmunología (Adriana Garibay Escobar)                          04/12/11    10:57  am. 

                                                                                                                                                                                                  

Práctica 6: PRUEBA A LA INVERSA (PRUEBA PARA GRUPOS ABO)

Objetivo

Al término de la práctica el alumno estará capacitado para comprobar o corroborar indudablemente la tipificación sanguínea.

Fundamento

El suero del paciente que contiene antígenos se ponen en contacto con los eritrocitos que contiene anticuerpos formando un complejo Ag-Ac, que se manifiesta microscópicamente mediante una aglutinación.

Materiales y sustancias

       Equipo de venopunción

       Placa de vidrio excavada

       Aplicadores

       Eritrocitos lavados A y B conocidos

       Suero del paciente.

Procedimiento

1.- Se preparan suspensiones de hematíes al 2% en la siguiente forma, en un tubo de ensayo marcado con la letra A se pone una gota de sangre A y otro marcado con la letra B se pone una gota de sangre B, se llenan los tubos con solución salina y se centrifugan a 3400 r.p.m. durante 3 minutos y se decanta el líquido sobrenadante invirtiendo los tubos.

2.- A cada uno de los tubos se añade 1cm de solución salina y se resuspenden los hematíes.

3.- Se ponen 2 gotas separadas de suero problema sobre una lámina de vidrio, a la gota de la izquierda se le agrega 1 gota de la suspensión de hematíes A y a la derecha 1 gota de la suspensión de hematíes B.

INTERPRETACIÓN

A)      Si el suero problema aglutina  los glóbulos rojos A significa que tiene Ac A, el suero que tiene Ac A corresponde a la sangre B, el suero problema, corresponde a una sangre del grupo B.

B)      Si el suero problema aglutina  los glóbulos rojos B significa que tiene Ac B, el suero que tiene Ac B corresponde a la sangre A, el suero problema, corresponde a una sangre del grupo A.

C)      Si el suero problema aglutina  los glóbulos rojos A y B significa que tiene Ac A y B, el suero que tiene Ac A y B corresponde a la sangre O, el suero problema, corresponde a una sangre del grupo O.

D)     Si el suero problema no aglutina  los glóbulos rojos A y B significa que no tiene Ac ni A ni B, por lo que el suero problema, corresponde a una sangre del grupo AB.